Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

19 октября 1979 г. N 2097-79

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДУРСБАНА

В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ

И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

 

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

 

1. Краткая характеристика препарата

 

Дурсбан.

О,О-диэтил-О-(3,5,6-трихлорпиридил)-тиофосфат.

 

             Cl     Cl

              \// \/

           S   │  ││

           ||  │  ││

   (C H O) P-O-\\ /\                                     C H  O NCl SP

     2 5  2      N  Cl                                    9 11 3   3

                                                         Мол. масса 350,59.

 

    Дауко 179, ЕНТ 27311, хлорпирифос.

    Чистое   вещество   дурсбана   -  белые  кристаллы  со  слабым  запахом

                                   -5

меркаптана.  Давление пара 1,9 х 10   мм рт. ст. при 25 °С. Растворимость в

воде  0,0002  г  в  100  мл.  Хорошо  растворим  в большинстве органических

растворителей.

Инсектицид стабилен длительный период при комнатной температуре в нейтральной и слабокислой среде. Скорость химического распада увеличивается пропорционально повышению температуры и pH.

Устойчивость к воздействию УФ-света снижается при повышении влажности. Дурсбан 40% э.к. рекомендуется для испытаний на хлопчатнике против хлопковой совки, карадрины и сосущих вредителей (1,5 - 2,0 кг/га), в борьбе с колорадским жуком на картофеле (1,2 - 2,0 кг/га), на плодовых культурах против яблонной плодожорки, клещей и тлей в концентрации 0,2%, на свекле в борьбе с обыкновенным свекловичным долгоносиком в дозировке 1,5 - 2,0 кг/га.

Гранулированный дурсбан представляет интерес в борьбе с подгрызающими совками на табаке, хлопчатнике, а также с проволочниками на кукурузе, картофеле.

    Дурсбан  высокотоксичен  для  теплокровных.  ЛД   для крыс при оральном

                                                   50

введении - 135 - 163 мг/кг.

ПДК и ДОК дурсбана в продуктах питания, воде и почве еще не установлены.

 

2. Методика определения дурсбана

 

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на экстракции дурсбана из проб смесью ацетона с 0,05 н водным раствором хлорида кальция (1:1), очистке перераспределением в н-гексан и хроматографическом (ТСХ и ГЖХ) определении.

Хроматографическое в тонком слое определение проводится на пластинках со слоем силикагеля марки КСК или на "Силуфоле-UV 254". Хроматографируют в системе н-гексан - ацетон (9:1), проявляют пластинки 2,6-дибром-N-хлорхинонимином или другими пригодными для фосфорорганических инсектицидов проявителями.

Для газохроматографического определения используют детекторы ДТИ, по захвату электронов (ДЭЗ) или постоянной скорости рекомбинации (ДПР), колонку стеклянную с 5% SE-30 на хроматоне N-AW-ДМСS длиной 1 м.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

 

                                            ТСХ                 ГЖХ

 

Минимально детектируемое количество    0,5 - 3 мкг       1 нг

Нижний предел определения              0,1 - 0,5 мг/кг   0,005 - 0,01 мг/кг

                                       0,1 мг/л          0,002 мг/л

Р - размах варьирования, %             +/- 4,0           +/- 4,0

_

с - среднее значение определения, %    96,4%             96,4%

S - стандартное отклонение, %          3,3               3,3

Доверительный интервал среднего при    96 +/- 4          96 +/- 4

р = 0,95 и n = 5, %

 

2.1.3. Избирательность метода

Другие ФОП не мешают определению.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, ч., ГОСТ 2603-63.

Гексан, х.ч., МРТУ 6-09-2937-66.

Кальций хлористый, х.ч., ГОСТ 4161-67.

Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-66.

Уголь активированный марки КАД или ОУ-А.

Силикагель КСК с флуоресцирующей добавкой или пластинки "Силуфол-UV 254".

Окись алюминия для хроматографии, МРТУ 6-09-5296-68-4.

5% SE-30 на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20).

Проявляющие реактивы:

1. 0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане.

2. 1-процентный раствор 4-(р-нитробензил)-пиридина в ацетоне;

10-процентный раствор тетраэтиленпентамина в ацетоне.

3. Бромфеноловый синий (0,03 г бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона, затем смесь разбавляют до 100 мл 0,5-процентным водно-ацетоновым раствором азотнокислого серебра (1 ч. воды : 3 ч. ацетона)); 5-процентный раствор уксусной кислоты.

Азот особой чистоты.

Стандартные растворы дурсбана: 0,1 - 1,0 мкг/мл в гексане.

2% полиэтиленгликольсукцинат на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16 - 0,2 мм (для альтернативной колонки)).

Водород.

2.3. Приборы и посуда

Хроматограф Цвет-106 или аналогичный прибор с детектором термоионным или по захвату электронов (постоянной скорости рекомбинации).

Аппарат для встряхивания.

Ротационный вакуумный испаритель или другой прибор для отгонки растворителей под вакуумом.

Хроматоскоп (хемоскоп) с излучением 250 - 280 нм.

Колбы конические со шлифами на 250 - 500 мл.

Колбы круглодонные на 100 - 500 мл.

Делительные воронки на 0,5 - 1,0 л.

Колбы мерные на 100 мл.

Колонки для адсорбционной хроматографии длиной 30 см, внутренним диаметром 15 мм.

Хроматографическая камера.

Камера для опрыскивания хроматограмм.

Пульверизаторы.

Пипетки на 0,1 мл, 1 мл, 5 мл, 10 мл.

Почвенное сито.

Микрошприц на 10 мкл.

Центрифуга с центрифужными пробирками на 500 мл.

Цилиндры мерные с притертой пробкой на 50 мл.

2.4. Отбор проб и подготовка их к анализу.

Растительную пробу (картофель, лук, яблоки, сено, силос и листья зеленых растений, в том числе хлопчатника) измельчают ножом на кусочки 0,5 куб. см и отбирают среднюю пробу 25 г.

Почву в естественно-влажном состоянии или воздушно-сухую просеивают через почвенное сито и отбирают для анализа среднюю пробу 10 г.

Проба воды - 100 мл.

2.5. Проведение определения

Анализируемые навески помещают в конические колбы, пробы воды - в делительные воронки, куда добавляют по 5 г хлористого кальция.

Из растений дурсбан экстрагируют смесью ацетона с водой (1:1) трижды по 40 - 50 мл, из почвы - 50 мл смеси ацетона с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (1:1). К пробам воды в делительные воронки добавляют равный объем ацетона. Экстракцию инсектицида из проб производят с помощью механического встряхивания в течение 30 мин. (для воды и растений) или 1 - 1,5 час. для почвы при комнатной температуре. Далее пробы центрифугируют при 3000 об./мин. (центрифугирование можно заменить фильтрованием). Объединенные экстракты из растительных проб, а также пробы воды охлаждают в холодильнике или в смеси льда с солью. Выпавший осадок отфильтровывают. Объем центрифугата (фильтрата) замеряют и количественно переносят (весь или аликвотную часть) в делительную воронку, куда приливают н-гексан в количестве, составляющем меньше половины объема, находящегося там центрифугата, взбалтывают 3 - 5 мин. После расслоения жидкостей нижний водно-ацетоновый слой сливают в другую делительную воронку, а гексан-ацетоновую фракцию собирают в коническую колбу на 100 мл. Реэкстракцию гексаном проводят еще два раза. Объединенную гексан-ацетоновую смесь сушат над безводным сульфатом натрия и количественно переносят в колбу для отгона растворителей (сушить гексановую фракцию можно путем фильтрования через безводный сернокислый натрий). Растворитель выпаривают на ротационном испарителе досуха при температуре не выше 40 °С. Дальнейшее определение проводят хроматографическими методами.

В некоторых случаях для растительных проб требуется еще дополнительная очистка. С этой целью применяют колоночную хроматографию, а именно пробу, сконцентрированную до 3 - 5 мл, вносят в колонку (30 см х 1,5 см), заполненную слоем сернокислого натрия (2 - 3 см), окиси алюминия (3 см), активированного угля КАД-молотый или ОУ-А (3 см) и снова безводного сернокислого натрия (1 см). Предварительно через колонку пропускают 30 - 40 мл хлороформа для уменьшения сорбционной емкости. Из колонки дурсбан элюируют 100 мл хлороформа. Хлороформ удаляют под вакуумом, остаток растворяют в гексане и определяют количество инсектицида хроматографическими методами.

2.5.1. Методы аналитического определения

Проба с помощью капилляра или микропипетки наносится на хроматографическую пластинку со слоем силикагеля или на "Силуфол". Параллельно на пластинку наносят серию стандартных растворов с содержанием 1; 5 и 10 мкг дурсбана. Хроматографируют в системе гексан - ацетон (9:1). Когда фронт растворителя поднимется от линии старта на 10 см, пластинку вынимают, проветривают и опрыскивают одним из проявляющих реагентов:

1. Хроматограмму опрыскивают 0,5-процентным раствором 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане, затем нагревают в течение 5 - 7 мин. в термостате при 110°. Дурсбан проявляется в виде оранжевых пятен на светлом фоне. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг.

2. Хроматограмму опрыскивают 1-процентным раствором 4-(р-нитробензил)-пиридином, нагревают в термостате 3 - 5 мин. при 110°, затем снова опрыскивают 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина в ацетоне. Дурсбан проявляется в виде сине-фиолетовых пятен на светлом фоне. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг.

3. Хроматограмму опрыскивают бромфеноловым реагентом с последующим снятием фона обработкой пластинки 5-процентным раствором уксусной кислоты. На пластинке проявляются сине-фиолетовые пятна дурсбана на светло-желтом фоне. Нижний предел обнаружения 3 мкг.

Пластинки со слоем силикагеля, в который внесен флуоресцирующий краситель, или "Силуфол-UV 254" можно без проявления просматривать в хемоскопе. Инсектицид определяют по тушению флуоресценции. Нижний предел обнаружения 1 мкг.

    R  для дурсбана в указанной системе растворителей на "Силуфоле" 0,65.

     f

    Содержание дурсбана в пробе вычисляют по формуле:

 

                                     С

                                      пр

                                 С = ---,

                                      А

 

    где:

    С   - количество препарата, найденное по хроматограмме,  при  сравнении

     пр

со стандартами, мкг;

    А - навеска исследуемой пробы в мг или объем воды в мл;

    С - содержание дурсбана в пробе, мкг/кг или мг/л.

Условия определения газожидкостной хроматографией

После отгонки растворителя к сухому остатку добавляют 1 - 2 мл гексана, колбу закрывают пробкой, тщательно обмывают внутреннюю поверхность колбы. Аликвотную часть раствора (2 - 5 мкл) вводят в испаритель хроматографа.

    Для   количественного   определения   дурсбана  используют  хроматограф

Цвет-106  или  другой  модели  с  детекторами  ДТИ  или  ДЭЗ (ДПР), колонки

стеклянные (1000 х 3 мм), заполненные 5% SE-30 на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16

- 0,20 мм). Температура испарителя 220°  (для  ДЭЗ)  или  250°  (для  ДТИ),

температура  колонки  190°  (для  ДЭЗ)  или  210°  (для  ДТИ),  температура

детектора 220° (для ДЭЗ). Скорость газа-носителя при работе на ДЭЗ (ДПР) 60

мл/мин.,  продув  детектора 150 мл/мин.; скорости газов при работе на ДТИ -

азота  21  мл/мин.,  водорода 15 мл/мин., воздуха 420 мл/мин. Рабочая шкала

                     -10

электрометра  1  х 10   . Скорость движения ленты самописца 240 мм/час (при

работе на ДЭЗ) или 600 мм/час (при работе на ДТИ).

Время удерживания дурсбана в указанных условиях работы ДЭЗ (ДПР) 3 мин. 5 сек. или в указанных условиях работы ДТИ 6 мин. 20 сек.

Количество дурсбана в пробе проводят методом соотношения со стандартами по высоте пиков.

В хроматограф вводят 2 мкл рабочего раствора. Линейность детектирования сохраняется в пределах 1 - 20 нг.

2.6. Содержание дурсбана в анализируемой пробе вычисляют по формуле:

 

                                Н   х С   х V

                                 пр    ст

                            С = -------------,

                                Н   х V  х А

                                 ст    а

 

    где:

    С - содержание дурсбана в анализируемой пробе, мг/кг (мг/л);

    Н   - высота пика анализируемой пробы, мм;

     пр

    Н   - высота пика стандарта, мм;

     ст

    С   - содержание дурсбана в стандарте, нг;

     ст

    V  - объем аликвоты, вводимой в хроматограф, мкл (2 мкл);

     а

    V - общий объем рабочего раствора, мл;

    А - навеска анализируемой пробы (в пересчете на сухое вещество), г, или

объем воды, мл.

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание", готовят более разбавленные растворы, добавляя к конечному раствору пипеткой известное количество гексана.

В качестве альтернативной колонки можно использовать стеклянную колонку длиной 2 м и внутренним диаметром 3 мм, заполненную хроматоном N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм) с 2% полидиэтиленгликольсукцинатом.

Требования безопасности

Общепринятые требования безопасности при работе с горючими растворителями и фосфорорганическими пестицидами.

Авторы

Петрова Т.М., Андреев Ю.Б. - Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, Ленинград.