Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

12 мая 1983 г. N 2782-83

 

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ

ФЕКАМА-ТРИБУФОНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

 

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

 

    CH O  O

      3  \││

          P-CH-CCl

         /  │     3

     CH O   O-CO-C H                                            М.м. 327,5.

       3          3 7

 

Фекама-трибуфон (бутонат) - активное вещество 0,0-диметил-(1-бутирокси-2,2,2-трихлорэтил)фосфонат.

    Технический  продукт  -  прозрачная  маслянистая жидкость от желтого до

желто-коричневого  цвета.  Нерастворим  в  воде,  растворим  в  большинстве

органических  растворителей.  Устойчив  в  нейтральной и слабокислых водных

                                  -3

средах. Давление  паров  -  4 х 10   мм рт. ст. при 20 °С, летучесть - 71,7

мг/куб. м при 20 °С. ЛД   для крыс - 1780 мг/кг.

                       50

 

I. Характеристика метода

 

1. Определение основано на: а) газожидкостной хроматографии фекама-трибуфона с детектором постоянной скорости рекомбинации. Избирательность метода обеспечивается использованием различных подвижных фаз. Для дополнительной идентификации определение можно проводить на термоионном детекторе;

б) хроматографировании препарата в тонком слое силикагеля с последующим обнаружением зон локализации препарата путем обработки растворами различных проявляющих реагентов: 1) последовательная обработка пластинок 1-процентным раствором 4-нитробензил-пиридина в ацетоне, затем 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина в ацетоне; 2) раствором азотнокислого серебра в ацетоне с последующим облучением УФ-светом.

2. Отбор проб воздуха с концентрированием (бумажный фильтр "синяя лента", смесь ацетон - вода (7:3)).

3. Предел измерения в анализируемом объеме пробы -

ГЖХ - 2,0 нг в 5 мкл;

ТСХ - 2 мкг.

4. Предел измерения в воздухе - 0,4 мг/куб. м.

5. Диапазон измеряемых концентраций -

ГЖХ - 0,4 - 8 мг/куб. м;

ТСХ - 0,5 - 15 мг/куб. м.

6. Определению не мешают другие фосфорорганические пестициды.

7. Граница суммарной погрешности измерения -

ГЖХ - 14,6%, ТСХ - 15,9%.

    8.  ПДК  фекама-трибуфона  в  воздухе  не  установлен.  ОБУВ      = 1,2

                                                                расч

мг/куб. м.

 

II. Реактивы, растворы, материалы

 

Фекама-трибуфон, х.ч.

Основной стандартный раствор фекама-трибуфона, содержащий 500 мкг/мл действующего вещества, готовят растворением 50 мг препарата в 100 мл ацетона в мерной колбе с притертой пробкой. Хранят в холодильнике в течение 2-х месяцев.

Стандартный раствор фекама-трибуфона, содержащий 10 мкг/мл действующего вещества в ацетоне. Хранят в холодильнике в течение 2-х недель.

Ацетон, ч., ГОСТ 2603-79.

Бензол, ч., ГОСТ 5955-75.

н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.

Натрий сернокислый безводный, ч., ГОСТ 4166-76.

Хлороформ, х.ч., ГОСТ 20015-74.

 

К методу ТСХ

 

Диэтиловый эфир, х.ч., ГОСТ 6262-79.

Проявляющие реагенты:

N 1. а) 1-процентный раствор 4-(п-нитробензил)пиридина в ацетоне;

б) 10-процентный раствор тетраэтиленпентамина в ацетоне.

N 2. Раствор азотнокислого серебра: 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл 25-процентного аммиака, смесь доводят до 100 мл ацетоном.

Подвижный растворитель: бензол - ацетон (3:1).

Азотнокислое серебро, х.ч., ГОСТ 1277-81.

Аммиак водный, ч., ГОСТ 3760-79.

 

К методу ГЖХ

 

Носитель хроматон N-AW (80 - 100 меш) с 5% SE-30 или QF-17.

Азот газообразный особой чистоты, содержание кислорода не более 0,003%, ГОСТ 9293-74.

 

III. Применяемая посуда и приборы

 

Электроаспиратор для отбора проб воздуха, ТУ 64-1-862-77.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Склянка для промывания и очистки газов (склянка Дрекселя) ТУ-25-11-1062-75.

Воронки делительные емк. 250 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические со шлифами емк. 100 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы грушевидные емк. 50, 100 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы мерные на 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Фильтры бумажные обеззоленные "синяя лента", ТУ 6-09-1678-77.

Пипетки на 0,1 мл, ГОСТ 20292-74.

Цилиндры мерные емк. 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

 

К методу ТСХ

 

Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-75.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.

Пластинки "Силуфол" (Chemapol, ЧССР).

 

К методу ГЖХ

 

Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов (детектором постоянной скорости рекомбинации - ДПР) марки "Цвет-106", "Цвет-110", "Газохром 1109" и др.

Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренний диаметр 3 мм.

 

IV. Условия отбора проб воздуха

 

Воздух со скоростью 0,5 л/мин. последовательно аспирируют через помещенный в фильтродержатель бумажный фильтр "синяя лента" и для поглощения паров через склянку Дрекселя со смесью ацетон - вода 100 мл (7:3). Отбирают 10 л воздуха. Длительность хранения проб в холодильнике не более 2 дней.

 

V. Условия анализа

 

Бумажные фильтры, содержащие аэрозоль, из фильтродержателя помещают в коническую колбу и заливают 40 мл ацетона. Экстрагируют пестицид из фильтра в течение 1 часа. Экстракцию повторяют трижды. Экстракт сушат сернокислым натрием безводным (20 г) и сливают в колбу для отгонки растворителя. Смесь ацетон-вода из поглотителя переносят в делительную воронку, прибавляют 100 мл дистиллированной воды и реэкстрагируют препарат дважды по 30 мл хлороформа. Объединенный хлороформный экстракт сушат сернокислым натрием безводным (20 г) и сливают в колбу для отгонки растворителя, объединяя с экстрактом из фильтров. Отгоняют растворитель под вакуумом при температуре бани 40 °С до объема 0,2 - 0,3 мл. Досуха упаривают на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют (ГЖХ и ТСХ).

 

Определение методом газожидкостной хроматографии

 

Носитель - хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм).

Ввод через самоуплотняющуюся мембрану.

Вводимый объем - 5 мкл.

Условия анализа приведены в таблице 1.

 

Таблица 1

 

УСЛОВИЯ АНАЛИЗА

 

┌────────────────────────────┬─────────────┬──────────────────┬───────────┐

│Хроматографические параметры│     ДПР     │       ДПР        │    ТИД    │

├────────────────────────────┼─────────────┼──────────────────┼───────────┤

│Неподвижная фаза            │5% SE-30     │4% SE-30 + 6% QF-1│5% SE-30   │

│Температура колонки         │180 °С       │180 °С            │200 °С     │

│Температура испарителя      │220 °С       │210 °С            │210 °С     │

│Температура детектора       │220 °С       │230 °С            │210 °С     │

│Скорость азота, мл/мин.     │70           │70                │22         │

│Время удерживания           │2 мин.       │3 мин.            │2 мин. 23 с│

│Минимально детектируемое    │2 нг         │0,4 нг            │4 нг       │

│количество                  │             │                  │           │

│Линейный диапазон           │2 - 30 нг    │1,25 - 10 нг      │4 - 20 нг  │

│детектирования              │             │                  │           │

│                            │        -12  │                  │           │

│Шкала электрометра          │-20 х 10    А│                  │           │

└────────────────────────────┴─────────────┴──────────────────┴───────────┘

 

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Для этого перед и после анализа проб вводят в хроматограф по 5 мкл стандартного раствора препарата N 2, измеряют высоту пиков и вычисляют среднее арифметическое из 5 определений. Если при введении в хроматограф аликвотной части (5 мкл) конечного экстракта получают слишком большие пики или происходит "зашкаливание", что свидетельствует о наличии большого количества анализируемого вещества, готовят более разбавленные растворы, добавляя в конечный раствор пипеткой замеренное количество гексана.

Концентрацию препарата в мг/куб. м (Х) в воздухе вычисляют по формуле:

 

                                 G х H  х V

                                      2    1

                             Х = ------------,

                                 H  х V х V

                                  1        20

 

    где:

    G   -   количество   препарата  в  стандартном  растворе,  введенном  в

хроматограф, мкг;

    H  - высота пика препарата в стандартном растворе, мм;

     1

    H  - высота пика препарата в анализируемом растворе, мм;

     2

    V - объем раствора пробы, введенный в хроматограф, мл;

    V  - общий объем раствора пробы, мл;

     1

    V   - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным

     20

условиям, л.

 

Определение методом тонкослойной хроматографии

 

Экстракт после газожидкостного определения доупаривают до 0,2 - 0,3 мл и количественно наносят при помощи капиллярной пипетки на хроматографическую пластинку "Силуфол" так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки. Колбочку с экстрактом 2 - 3 раза омывают небольшими порциями эфира, который также наносят в центр первого пятна. Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см от пробы наносят стандартные растворы, содержащие 3,5 или 10 мкг действующего вещества препарата.

Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, в которую налита смесь растворителей бензол - ацетон в соотношении 3:1. Время насыщения камеры 15 - 20 минут. Край пластинки не должен быть погружен в раствор более чем на 0,5 см. После поднятия фронта подвижного растворителя на 10 см пластинку поднимают и оставляют на несколько минут на воздухе для испарения подвижного растворителя. Затем пластинку обрабатывают одним из проявляющих реактивов:

1) 1-процентным раствором 4-(п-нитробензил)пиридина, нагревают пластинку в течение 5 минут при температуре 110 °С, затем обрабатывают 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина. Фекама-трибуфон проявляется в виде ярких фиолетово-синих пятен на белом фоне. Нижний предел обнаружения - 0,5 мкг;

    2)  раствором  азотнокислого  серебра  в  ацетоне,  затем  помещают под

источник УФ-света на 3 мин. Фекама-трибуфон проявляется в виде черных пятен

на сером фоне.  Нижний предел  обнаружения - 2 мкг.  R  фекама-трибуфона  в

                                                      f

системе бензол-ацетон (3:1) составляет 0,68 +/- 0,05.

    В  качестве  подвижного  растворителя можно использовать смесь  гексан-

ацетон (1:1), R  = 0,68 +/- 0,05.

               f

Количество препарата в пробе определяют сравнением интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандартного раствора. Измерение площади проводится с помощью миллиметровой бумаги. Строится калибровочный график зависимости количества препарата (в мкг) от площади пятна (кв. мм). Прямолинейная зависимость между площадью пятна и содержанием препарата в пятне соблюдается в интервале 1 - 10 мкг. Если содержание препарата в пробе превышает 10 мкг, то для нанесения на пластинку необходимо брать аликвотную часть экстракта (0,1 - 0,2 мл) параллельной пробы.

Концентрацию препарата в мг/куб. м воздуха (X) вычисляют по формуле:

 

                                   G х V

                                        1

                               X = -------,

                                   V   х V

                                    20

 

    где:

    G  -  количество  препарата, найденное в анализируемом объеме раствора,

мкг;

    V  - общий объем пробы, мл;

     1

    V - объем пробы, взятый для хроматографирования, мл;

    V   - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным

     20

условиям, л.

 

VI. Требования техники безопасности

 

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.

 

VII. Разработчики

 

ВНИИГИНТОКС, Киев.