Утверждены

Минздравом СССР

12 мая 1983 г. N 2797-83

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СУМИЛЕКСА В ВОДЕ, ПОЧВЕ,

СЕМЕНАХ ПОДСОЛНЕЧНИКА И БИОСРЕДАХ МЕТОДОМ

ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

 

--------------------------------

<*> Разработаны В.Н. Кавецким, Г.Г. Андриенко (УкрНИИЗР); Л.Г. Александровой (КНИИГТиПЗ).

 

    Краткая характеристика  препарата.  Сумилекс - N-(3,5-дихлорфенил)-1,2-

диметилциклопропан-1,2-дикарбоксимид.   Брутто - формула      C  H  O Cl N.

                                                               13 11 2  2

Молекулярная  масса  284,1.  Общепринятое название - процимидон.  Химически

чистый препарат - белое кристаллическое вещество, т. пл.  166  °C. Устойчив

к  действию  температуры  и  влаги.  Трудно  растворим в воде,  растворим в

большинстве органических растворителей: ацетоне, ксилоле, диэтиловом эфире,

гексане и др. Не разлагается под действием разбавленных кислот  и  щелочей,

летучесть  технического  продукта 0,005 мг/куб. м при 20 °C. Применяется  в

качестве  фунгицида  в  борьбе  с  ботритисом  и  склеротинией  на яблонях,

землянике, виноградной лозе, подсолнечнике. ДСД 0,006 мг/кг.

Принцип метода. Метод основан на извлечении препарата из проб воды, почвы, семян подсолнечника и биосред (кровь, моча) органическим растворителем, очистке экстрактов и последующем хроматографировании в тонком слое силикагеля в подвижной фазе на основе гексана. Обнаружение сумилекса проводят с помощью раствора аммиаката серебра и последующего облучения УФ-светом или по реакции азосочетания.

Метрологическая характеристика метода представлена в таблице 136.

 

Таблица 136

 

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

 

┌────────────┬─────────────┬──────────────┬────────┬────────┬─────────────┐

│Анализируе- │   Предел    │    Предел    │Среднее │Стан-   │Доверительный│

│мый объект  │обнаружения, │ определения, │значение│дартное │  интервал   │

│            │     мкг     │  мг/кг или   │опреде- │откло-  │  среднего   │

│            │             │    мкг/мл    │ления, %│нение, %│ определения │

│            ├─────────┬───┼─────────┬────┤        │        │ при n = 5,  │

│            │"Силуфол"│КСК│"Силуфол"│КСК │        │        │ p = 0,95, % │

├────────────┼─────────┼───┼─────────┼────┼────────┼────────┼─────────────┤

│Вода        │2        │10 │0,02     │0,08│86      │+/- 10,8│86 +/- 13,8  │

│Почва       │2        │10 │0,2      │0,4 │82      │+/- 7,2 │82 +/- 9,2   │

│Семена под- │2        │10 │0,2      │0,4 │84      │+/- 6,2 │84 +/- 7,8   │

│солнечника  │         │   │         │    │        │        │             │

│Кровь       │0,2      │1  │0,02     │-   │79,6    │+/- 3,1 │79,6 +/- 4,0 │

│Моча        │0,2      │1  │0,02     │-   │79,4    │+/- 4,8 │79,4 +/- 6,1 │

└────────────┴─────────┴───┴─────────┴────┴────────┴────────┴─────────────┘

 

Избирательность метода. Определению сумилекса не мешают фосфор- и хлорорганические пестициды.

Реактивы и растворы. Сумилекс х.ч. или 50-процентный с.п. Ацетон х.ч. Аммиак водный, ч.д.а. Гексан ч. Диэтиловый эфир х.ч., или медицинский для наркоза. Азотная кислота х.ч. Серная кислота х.ч., 25-процентная. Хлороводородная кислота х.ч., 0,1 н и 1 н Гидроксид калия ч.д.а., 30-процентный раствор в 50-процентном этаноле. Йодид калия х.ч. Йодид калия х.ч. Нитрит натрия х.ч. Сульфат натрия безводный, х.ч. 1-Нафтол ч.д.а. 1-Нафтиламин ч.д.а. N-(1-нафтил)-этилендиамин дигидрохлорид ч. о-Толуидин ч. Метанол х.ч. Нитрат серебра х.ч. Этанол х.ч., 50-процентный раствор. Подвижная фаза: при анализе почвы, воды и семян гексан-ацетон в соотношении 5:1 ("Силуфол") или 2:1 (силикагель КСК); при анализе крови и мочи гексан-ацетон 3:1 ("Силуфол") или гексан-хлороформ 1:2 (силикагель КСК) или 1:3. Водно-метанольный раствор (2:1).

Проявляющие реагенты: N 1 - раствор нитрата серебра в аммиаке и ацетоне (0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 5 мл аммиака и доводят объем до 100 мл ацетоном). Раствор хранят на холоде до 5 дней; N 2 - о-толуидиновый (к 50 мг о-толидина приливают 8 мл ледяной уксусной кислоты, 125 мл воды и 250 мг йодистого калия). Хранят на холоде; N 3 - о-толуидиновый (100 мг о-толуидина растворяют в 5 мл ледяной уксусной кислоты, прибавляют 0,5 г йодистого калия или йодистого кадмия и доводят объем смеси до 250 мл водой). Хранят на холоде; N 4 - раствор нитрита натрия (к 45 мл воды приливают 5 мл концентрированной хлороводородной кислоты и растворяют 1 г нитрита натрия). Применяют свежеприготовленным; N 5 - раствор 1-нафтола (2,8 г едкого кали растворяют в 50 мл воды и прибавляют 0,1 г 1-нафтола). Применяют раствор свежеприготовленным; N 6 - раствор 1-нафтиламина (1 г 1-нафтиламина растворяют в 50 мл ацетона. Перед опрыскиванием смешивают с 1 н раствором хлороводородной кислоты в соотношении 1:1); N 7 - раствор N-(1-нафтил)-этилендиамин дигидрохлорида, 2-процентный в 0,1 н хлороводородной кислоте.

Силикагель марки КСК или КСС, размер частиц 100 меш для приготовления сорбционной массы. Перед использованием силикагель испытывают на присутствие мешающих определению примесей. Силикагель (3 - 5 г) промывают 5 - 10 мл эфира, эфир упаривают до 0,2 мл и наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол". Далее поступают так, как описано для анализа пестицида. Если силикагель содержит примеси, мешающие определению сумилекса, его подвергают очистке. Для этого его кипятят в разведенной хлороводородной кислоте (1:1) в течение 2 - 3 ч. Промывают горячей водопроводной, а затем дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных вод и до удаления в промывных водах следов хлоридов (проба с азотнокислым серебром). После промывки сушат, периодически помешивая, в шкафу при 130 °C в течение 6 ч, дробят и просеивают через сито 100 меш. Хранят в склянке с притертой пробкой. Ледяная уксусная кислота х.ч. Сульфат кальция безводный, х.ч. или гипс.

Приготовление стандартного раствора. Для анализа воды, почвы, семян готовят стандартный раствор сумилекса в ацетоне - 100 мкг/мл. Растворяют 10 мг сумилекса х.ч. в 100 мл ацетона. Для анализа биосред готовят стандартный раствор пестицида в диэтиловом эфире - 100 мкг/мл. Если в наличии нет х.ч. препарата, то готовят раствор из 50-процентного с.п. Для этого 20 мг порошка растворяют в 100 мл эфира, фильтруют через 30 мин. Растворы устойчивы в течение 1 мес. при хранении на холоде.

Приборы, аппаратура, посуда. Для экстракции. Аппарат для встряхивания. Баня водяная. Баня со льдом. Ротационный вакуумный испаритель с набором колб. Колбы: грушевидные для отгонки растворителя; мерные на шлифах, цилиндры; конические плоскодонные с пробками на 150 и 250 мл. Пипетки и микропипетки на 0,1; 0,2; 1; 2 и 5 мл. Воронки делительные на 150 - 250 мл. Мерные пробирки на шлифах на 10 мл.

Для аналитического определения. Пластинки "Силуфол" размером 150 x 150 мм. Пластинки стеклянные размером 90 x 120 или 150 x 150 мм. Камера хроматографическая размером 145 x 200 мм для стеклянных пластинок и 170 x 240 мм для пластинок "Силуфол". Пульверизатор стеклянный. Камера для обработки хроматограмм. Микропипетки (см. выше) для нанесения проб или капилляры. Источник УФ-света. Термостат.

Приготовление хроматографических пластинок. Для приготовления 10 - 12 пластинок со слоем силикагеля берут 35 г силикагеля, смешивают с 2 - 3,5 г гипса (или сернокислого кальция), растирают в ступке и небольшими порциями приливают 90 мл воды. Перемешивают до получения массы однородной консистенции. Тонким слоем наливают на пластинки. Сушат при комнатной температуре в горизонтальном положении в течение 16 - 18 ч. Хранят в эксикаторе.

Ход анализа. Экстракция. Анализируемую воду (250 мл) помещают в делительную воронку и экстрагируют сумилекс хлороформом трижды порциями по 50; 30 и 30 мл. Экстракт сушат безводным сульфатом натрия (2 - 3 г) и сливают в круглодонную колбу. Объединенный экстракт помещают на водяную баню и хлороформ отгоняют до объема 0,5 мл.

Пробу почвы (50 г) помещают в коническую колбу, заливают 100 мл хлороформа так, чтобы почва была полностью покрыта растворителем, и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 1 ч. Экстракцию повторяют дважды порциями по 30 мл, объединенный экстракт фильтруют через воронку с бумажным фильтром в круглодонную колбу. Растворитель отгоняют на водяной бане до объема 0,5 мл.

Навеску семян подсолнечника (50 г) заливают 100 мл хлороформа и экстрагируют в течение 1 ч на аппарате для встряхивания. Экстракт фильтруют, остаток в колбе и на фильтре трижды промывают хлороформом порциями по 30 мл. Растворитель отгоняют на водяной бане, остаток упаривают досуха. Сухой остаток заливают 30 мл смеси вода-метанол (2:1) и оставляют на 1 ч. Смесь переносят в делительную воронку, при этом фильтруют через воронку с бумажным фильтром. Колбу смывают трижды 10 мл водно-метанольного раствора. Сумилекс экстрагируют из смеси вода-метанол хлороформом тремя порциями по 50; 30 и 30 мл, встряхивая делительную воронку по 3 мин. Полученный экстракт сливают в круглодонную колбу, пропуская через слой безводного сернокислого натрия (2 - 3 г). Хлороформ отгоняют на водяной бане до объема 0,5 мл.

Пробу цельной крови (0,5 мл) вносят в пробирки с притертыми пробками, смоченные предварительно раствором лимоннокислого натрия. Приливают по 5 мл эфира, экстрагируют на холоду, встряхивая в течение 30 мин. После отстаивания эфир сливают, экстракцию повторяют 5 мл эфира. Экстракты объединяют, растворитель отгоняют в ротационном испарителе до объема раствора 0,2 - 0,5 мл и количественно наносят на хроматографическую пластинку.

Пробу мочи (10 мл) вносят в колбу и приливают 10 мл эфира, помещают колбу в баню со льдом и экстрагируют встряхиванием в течение 30 мин. Переносят в делительную воронку и после отстаивания отделяют эфир, пропуская его через безводный сернокислый натрий (2 г), в колбу для отгонки растворителей. Экстракцию повторяют еще дважды по 10 мл эфира. Экстракты объединяют и отгоняют растворитель до объема раствора 0,2 мл, количественно наносят на хроматографическую пластинку.

Хроматографирование. Исследуемые экстракты с помощью микропипетки или капилляра наносят на хроматографические пластинки "Силуфол" или со слоем силикагеля. Справа и слева от пробы на расстоянии 15 мм наносят стандартные растворы сумилекса, содержащие от 0,2 до 10 мкг или от 2 до 30 мкг - на "Силуфоле" и от 10 до 50 мкг - на силикагеле. Пластинки помещают в хроматографическую камеру, куда предварительно за 15 - 20 мин. наливают подвижную фазу. После достижения фронтом растворителя высоты 10 см пластинки извлекают из камеры, дают улетучиться парам растворителей, сушат на воздухе. Затем обрабатывают одним из проявляющих реагентов.

    При  анализе  воды,  почвы,  семян  подсолнечника после удаления следов

растворителей пластинку опрыскивают реагентом N 1 и помещают под УФ-свет на

10  мин.  Сумилекс  проявляется  в виде пятен черно-серого цвета на светлом

фоне. Величина R  0,45 +/- 0,05.

                f

Если используют пластинки "Силуфол", то при анализе проб крови, мочи проявление сумилекса проводят реактивами N 1, 2 или 3. Для этого пластинку помещают на расстоянии 10 - 12 см от источника УФ-света и облучают хроматограммы 5 - 10 мин. (ОКН-11). Опрыскивают реактивом N 1 и после полного улетучивания следов аммиака пластинку снова помещают перед источником УФ-света на 30 - 40 с. Сумилекс проявляется в виде пятен черно-коричневого цвета на светлом фоне. Минимально определяемое количество 0,2 мкг. Облученную пластинку можно опрыскать реагентом N 2 или N 3, при этом сумилекс проявляется в виде пятна коричневого (N 2) или фиолетового (N 3) цвета. Минимально определяемое количество 0,5 мкг. Через 2 - 3 дня фиолетовый цвет пятен переходит в коричневый. Коричневый цвет устойчив до 2 мес.

В случае необходимости дополнительной идентификации на "Силуфоле" проводят реакцию азосочетания. Для этого после хроматографирования и улетучивания следов растворителей пластинку осторожно обрабатывают 30-процентным раствором гидроксида калия в 50-процентном этаноле до легкого увлажнения поверхности и помещают в сушильный шкаф на 20 мин. при температуре 150 °C. Охлажденные пластинки опрыскивают сначала реагентом N 4 и через 1 - 2 мин. - одним из реагентов N 5, 6, 7. Тотчас в зоне локализации сумилекса проявляется пятно, окрашенное в оранжево-желтый (N 5), темно-розовый (N 6) или сиреневый (N 7) цвет. Минимально определяемое количество 0,5 мкг (N 7) и 1 мкг (N 5, 6).

    Если  используют  пластинку  со  слоем  силикагеля,  то  для проявления

сумилекса  применяют  реагент  N  1  (порядок такой же, как и для пластинок

"Силуфол")  или  реакцию азосочетания после кислотного гидролиза. Для этого

пластинки  осторожно  обрабатывают  25-процентным  раствором серной кислоты

(примерно  1 - 2  мл)  и  помещают в сушильный  шкаф на 20 мин. при 150 °C.

Охлажденные пластинки опрыскивают реагентом N 4 и через 1 - 2 мин. - N 5, 6

или  7.  Тотчас  на  хроматограмме  сумилекс   проявляется  в  виде  пятна,

окрашенного  в  желто-оранжевый  (N 5),  темно-розовый  (N 6) или сиреневый

(N 7) цвет. Цвет пятен устойчив 2 дня.  Минимально определяемое  количество

1 мкг.  Величина  R  0,4  +/-  0,6.  Экстрактивные  вещества  крови  и мочи

                   f

определению  сумилекса не мешают.  Они имеют либо другую величину  R   либо

                                                                    f

другую окраску.

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят путем сравнения площади пятен проб и стандартных растворов. Их измеряют с помощью прозрачной или промасленной миллиметровой бумаги. Пропорциональная зависимость между площадью пятна и концентрацией наблюдается до 10 мкг (кровь, моча) и до 50 мкг (вода, почва, семена). Если в пробе содержится большое количество сумилекса, то следует анализировать аликвотную часть раствора.

Содержание сумилекса в пробе (X, мг/кг, мг/л, мкг/мл) рассчитывают по формуле

 

                                     AS

                                       2

                                 X = ---,

                                     PS

                                       1

 

    где:

    A  -   количество  стандартного  раствора,  пятно  которого по  площади

наиболее близко к пятну на хроматограмме пробы, мкг;

    S ,  S  - площади  пятен  соответственно  на  хроматограмме   стандарта

     1    2

(концентрация A) и пробы, кв. мм;

    P - масса или объем пробы, взятый для анализа, г или мл.

Требования техники безопасности. Соблюдать требования техники безопасности, обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями. При работе с кварцевой лампой необходимо пользоваться светозащитными очками.