Утверждены

Минздравом СССР

21 ноября 1984 г. N 3161-84

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 4-ХЛОР-2-МЕТИЛФЕНОКСИУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ

(2М-4Х) В ВОДЕ, ПОЧВЕ, РАСТИТЕЛЬНОМ МАСЛЕ И ПРОДУКТАХ

ПИТАНИЯ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

 

--------------------------------

<*> Разработаны В.Д. Чмилем, С.В. Чулковой (ВНИИГИНТОКС).

 

    Краткая    характеристика   препарата.   2М-4Х   (дикотекс,   МЦПА)   -

2-метил-4-хлорфеноксиуксусная    кислота.    Брутто-формула       C H O Cl.

                                                                   9 9 3

Молекулярная  масса 200,6. Белое кристаллическое вещество со слабым запахом

крезола,  т.  пл.  120  -  120,2  °C. Хорошо растворимо в этаноле, толуоле,

четыреххлористом  углероде,  диэтиловом  эфире,  дихлорэтане, хлорбензоле и

плохо  -  в  воде  (0,15  г  в  100 г  H O  при 25 °C).  Выпускается в виде

                                        2

80-процентного водорастворимого порошка и 40-процентного водного  раствора.

Применяется  в  качестве  гербицида  в  посевах  льна,  зерновых и злаковых

культур,  чаще всего в виде  натриевых  и  калиевых  солей.  В зерне, рисе,

картофеле, подсолнечном масле МДУ 0,05 мг/кг; горохе - 0,05  мг/кг.  В воде

рыбохозяйственных водоемов  ПДК  0,02  мг/л;  в водоемах санитарно-бытового

водопользования - 0,25 мг/л.

Принцип метода. Метод основан на экстракции 2М-4Х из гидролизованной пробы (растительный материал, молоко, масло) органическим растворителем, из проб воды и почвы - органическим растворителем с последующим определением методом ТСХ. С помощью предлагаемого метода можно определить 2М-4Х, находящуюся в анализируемой пробе как в свободном, так и в связанном состоянии в виде конъюгатов с эндогенными веществами пробы.

Метрологическая характеристика метода. Предел определения, мг/л или мг/кг: вода - 0,05; почва - 0,10; сено - 0,40; зерно - 0,03; молоко - 0,40; масло сливочное - 0,70; мясо - 0,50. Среднее значение определения при n = 6, %: 85; 75; 65; 65; 65; 85; 65; 75 соответственно.

Реактивы и растворы. Аммиак водный ч.д.а. Нитрат серебра ч.д.а. Ацетон х.ч. Гидрокарбонат натрия ч.д.а., 0,4 М водный раствор. Бромкрезоловый зеленый ч.д.а. н-Гексан х.ч. Гидроксид натрия х.ч., 0,1 М водный раствор. Пластинки для метода ТСХ типа "Силуфол". Проявляющие реагенты: N 1 (в мерную колбу на 100 мл помещают 0,5 г нитрата серебра, 5 мл дистиллированной воды, 7 мл аммиака, 25-процентный водный раствор, и доводят до метки ацетоном). При хранении в плотно закрытой склянке без доступа света годен для применения в течение месяца; N 2 (в мерную колбу на 100 мл помещают 0,04 г бромкрезолового зеленого, растворяют в 96-процентном этаноле, добавляют 0,1 М раствор гидроксида натрия до явно выраженного синего окрашивания и доводят до метки этанолом). Срок применения не ограничен. Силикагель ЛС 5/40 М для тонкослойной хроматографии с 13% гипса. Силикагель КСК. Хлороводородная кислота ч., 2 М водный раствор. Бензол х.ч. Стандартный раствор 2М-4Х в ацетоне концентрацией 100 мкг/мл. Уксусная кислота х.ч., ледяная. Фосфорно-вольфрамовая кислота х.ч., 40-процентный в.р. Хлороформ х.ч. Эфир. Этиловый спирт.

Приборы и посуда. Делительная воронка на 1 л. Колба Бунзена на 500 мл. Воронка Бюхнера, диаметр 13 см. Ротационный испаритель. Источник УФ-света. Водяная баня. Колбы: мерные на 10 и 100 мл; конические на 500 мл; двухгорлая круглодонная на 500 мл. Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Лабораторный холодильник стеклянный. Камера для хроматографирования. Микропипетки. Пластинки стеклянные размером 90 x 120 мм. Сито капроновое 100/120 меш. Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок. Электроплитка. Аппарат для встряхивания. Сушильный шкаф.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды 250 - 750 мл помещают в делительную воронку, подкисляют хлороводородной кислотой до pH 1, тщательно перемешивают и экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира (100; 50 и 50 мл). Объединенный эфирный экстракт переносят в делительную воронку, промывают небольшими порциями дистиллированной воды (15 - 20 мл) до нейтральной реакции промывных вод и затем трижды экстрагируют 0,5 М водным раствором гидрокарбоната натрия порциями по 50 мл. Объединенный водный экстракт 2 раза промывают хлороформом порциями 20 мл и 20 мл н-гексана, отбрасывая эти растворители, подкисляют хлороводородной кислотой до pH 1 и трижды экстрагируют диэтиловым эфиром порциями по 50; 30 и 30 мл. Объединенный эфирный экстракт промывают дистиллированной водой порциями по 15 - 20 мл до нейтральной реакции промывных вод, упаривают растворитель на ротационном испарителе до объема 2 мл и затем досуха током сухого воздуха.

Пробу сухой почвы 100 г, растертой и просеянной через сито с размером отверстий 1 мм, помещают в коническую колбу с пришлифованной пробкой на 500 мл, приливают 25 - 35 мл дистиллированной воды, 5 мл концентрированной хлороводородной кислоты, тщательно перемешивают, добавляют 150 мл ацетона и помещают на аппарат для встряхивания на 1 ч. Затем растворитель отфильтровывают под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр и почву на фильтре трижды промывают ацетоном порциями по 20 мл. Затем ацетон удаляют на ротационном испарителе, остаток из колбы переносят 100 мл дистиллированной воды, подкисленной хлороводородной кислотой до pH 1, в делительную воронку, трижды экстрагируют диэтиловым эфиром порциями по 50 мл и далее поступают так, как это описано при определении в воде.

Тщательно измельченную навеску из травы, сена, соломы, зерна 25 г (навеска зерна 50 г) помещают в круглодонную колбу на 1 л, приливают 100 мл 85-процентного водного раствора этилового спирта, тщательно перемешивают, присоединяют к колбе обратный холодильник и помещают на кипящую водяную баню на 1 ч, периодически перемешивая содержимое колбы. После охлаждения содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр "черная лента" под вакуумом на воронке Бюхнера и промывают осадок на фильтре двумя порциями по 50 мл 85-процентного водного раствора этилового спирта. Затем этиловый спирт упаривают из фильтрата на ротационном испарителе, к остатку добавляют 12 мл концентрированной хлороводородной кислоты, 5 мл дистиллированной воды и нагревают на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 1 ч для разрушения конъюгатов 2М-4Х. После охлаждения гидролизат фильтруют через бумажный фильтр "черная лента" на воронке Бюхнера под вакуумом и промывают остаток на фильтре тремя порциями по 20 мл 2 М водного раствора хлороводородной кислоты. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку, трижды экстрагируют диэтиловым эфиром порциями по 100; 50 и 50 мл и далее поступают так, как это описано при определении в воде.

Пробу молока 25 - 50 мл помещают в круглодонную колбу на 250 мл, прибавляют концентрированную хлороводородную кислоту (4,4 - 8,8 мл), тщательно перемешивают, присоединяют обратный холодильник и помещают на кипящую водяную баню для гидролиза на 1 ч. После охлаждения в колбу приливают 7,5 - 15,0 мл 40-процентного водного раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты, энергично встряхивают, приливают 100 - 200 мл дистиллированной воды и содержимое колбы фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера. Остаток на фильтре промывают 3 раза 2 М водным раствором хлороводородной кислоты порциями по 50 мл и далее поступают так, как это описано при определении в растительном материале.

Пробу сливочного масла (25 г) растворяют в 100 мл н-гексана, помещают в двугорлую круглодонную колбу на 500 мл, приливают 100 мл 2 М водного раствора хлороводородной кислоты, присоединяют к колбе обратный холодильник и помещают на кипящую водяную баню на 1 ч. Содержимое колбы перемешивают с помощью электромешалки. После охлаждения содержимого колбы слои разделяют в делительной воронке и гексановый слой дважды экстрагируют 2 М водным раствором хлороводородной кислоты порциями по 50 мл. Объединенный хлороводородный экстракт промывают дважды н-гексаном порциями по 25 мл, отбрасывая этот растворитель, и затем экстрагируют диэтиловым эфиром 3 раза по 50 мл. Эфирный экстракт промывают небольшими количествами (10 - 15 мл) дистиллированной воды до нейтральной реакции промывных вод, трижды экстрагируют 2М-4Х 0,5 М водным раствором гидрокарбоната натрия порциями по 50 мл и далее поступают так, как это описано выше.

Пробу из мяса (25 - 50 г) измельчают на мясорубке, помещают в двугорлую круглодонную колбу на 500 мл, приливают 2 М хлороводородную кислоту (100 - 200 мл), присоединяют обратный холодильник и помещают на кипящую водяную баню на 1 ч для гидролиза, перемешивая содержимое колбы с помощью электромешалки. После охлаждения в колбу приливают 15 мл 40-процентного водного раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты, 100 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивают и содержимое колбы фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера. Остаток на фильтре промывают 2 М водным раствором хлороводородной кислоты, объединенный фильтрат трижды экстрагируют диэтиловым эфиром порциями по 50 мл и далее поступают так, как это описано выше.

Перед проведением серийных анализов необходимо установить процент определения, т.е. процент возврата препарата из проб, к которым были добавлены различные количества препарата.

    Тонкослойная  хроматография.  Сухой  остаток  после упаривания эфирного

экстракта   растворяют   в   1   мл  ацетона  и  количественно  наносят  на

хроматографическую  пластинку  с  тонким  слоем силикагеля или на пластинку

"Силуфол".  На эту же пластинку наносят 2, 5 и 10 мкг 2М-4Х в виде раствора

в ацетоне и проводят хроматографирование в системе  растворителей н-гексан-

диэтиловый  эфир-уксусная  кислота  (50:50:2).    Для   хроматографирования

используют насыщенную  камеру.  Для  насыщения  стенки  камеры  обкладывают

фильтровальной    бумагой,   которая   касается   смеси   растворителей   и

пропитывается.  Через  2  ч  быстро  открывают  крышку  камеры  и  помещают

пластинку  для  развития  хроматограмм. После окончания хроматографирования

пластинку  извлекают  из  камеры  и  сушат на воздухе в вытяжном шкафу. Для

обнаружения 2М-4Х пластинку обрабатывают проявляющим реагентом N 1, сушат и

облучают  УФ-светом  в  течение  10  - 15 мин. При наличии в пробе 2М-4Х на

пластинке  появляется  серо-черное  пятно   на  белом   фоне   с  величиной

R  0,30 +/-  0,01. В качестве  второго  проявляющего  реагента  может  быть

 f

использован бромкрезоловый зеленый. После развития  хроматограммы пластинку

сушат на воздухе и помещают в сушильный  шкаф  при  110 °C  на 20  мин. для

удаления следов  уксусной   кислоты   и  затем   обрабатывают   проявляющим

реагентом N 2. Препарат 2М-4Х проявляется в виде желтого пятна  на  голубом

фоне. Минимально детектируемое количество на хроматограммах 1 мкг.

    Для  повышения надежности идентификации может быть использована  вторая

система  подвижных растворителей: бензол-уксусная  кислота  (5:1). Величина

R  2М-4Х в этой системе 0,54 +/- 0,01.

 f

    Определить  2М-4Х можно в присутствии 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты

2,4-Д  и  2,4-дихлорфенола.  Величины  R   для  этих  соединений  в системе

                                        f

н-гексан-диэтиловый  эфир-уксусная  кислота   (50:50:2)  -  0,25 и 0,50,  в

системе бензол-уксусная кислота (5:1) - 0,48 и 0,65 соответственно.

Обработка результатов анализа. Содержание 2М-4Х в пробе оценивают визуально, сравнивая размер и интенсивность окраски пятен стандартного соединения с размером и интенсивностью пятен пробы. Для определения содержания 2М-4Х в пробах (X, мг/л или мг/кг) используют формулу:

 

                                      A

                                  X = --,

                                      PR

 

где:

A - количество 2М-4Х в пробе, найденное сравнением со стандартом, мкг;

P - объем или масса пробы, мл или г;

R - процент определения, найденный предварительно.

Требования безопасности. Соблюдаются требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами.