Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1987 г. N 4382-87

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БЕНОМИЛА И БМК В РАСТЕНИЯХ, ПОЧВЕ И ВОДЕ

ПРИРОДНЫХ ВОДОЕМОВ ПОЛЯРОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ <*>

 

--------------------------------

<*> Разработаны В.Н. Кавецким, Г.Г. Андриенко (УкрНИИЗР).

 

Краткая характеристика препарата дана в Методических указаниях N 1112-73.

Принцип метода. Методика полярографического определения беномила и БМК, основанная на окислении БМК или продукта его разложения 2-аминобензимидазола (2-АБ) на угольном электроде, осуществляется двумя путями: БМК из анализируемой пробы извлекают этилацетатом, очищают экстракт перераспределением в солянокислую среду, а затем, после подщелачивания, - в этилацетат. Определяют БМК полярографическим методом; БМК из пробы извлекают этилацетатом, очищают экстракт перераспределением в соляную кислоту, а затем проводят щелочной гидролиз БМК до 2-АБ. Из экстракта 2-АБ извлекают этилацетатом и полярографируют. Полярографическое окисление БМК и 2-АБ проводят на фоне буферного раствора натрия тетраборатного кислого с pH 9,18.

Метрологическая характеристика метода. Метрологические данные приведены в таблице 120. Потенциалы окисления БМК 0,65 В; 2-АБ 0,35 В.

 

Таблица 120

 

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

 

┌────────────────────┬────────────────────────────────────┬──────────────────────────────────┐

│     Параметры      │ Полярографическое определение БМК  │        Полярографическое         │

│                    │                                    │     определение БМК по 2-АБ      │

│                    ├────────────┬───────────┬───────────┼────────────┬──────────┬──────────┤

│                    │    вода    │   почва   │ растения  │    вода    │  почва   │ растения │

├────────────────────┼────────────┼───────────┼───────────┼────────────┼──────────┼──────────┤

│Диапазон определяе- │0,004 - 0,02│0,02 - 1,00│0,02 - 1,00│0,002 - 0,01│0,01 - 0,5│0,01 - 0,5│

│мых концентраций,   │            │           │           │            │          │          │

│мг/кг, мг/л         │            │           │           │            │          │          │

│Предел обнаружения, │0,004       │0,02       │0,02       │0,002       │0,01      │0,01      │

│мкг в 1 мл фонового │            │           │           │            │          │          │

│раствора            │            │           │           │            │          │          │

│Предел определения, │0,04        │0,02       │0,02       │0,02        │0,01      │0,01      │

│мг/кг, мг/л         │            │           │           │            │          │          │

│Среднее значение    │83          │70         │78         │80          │72        │76        │

│определения стан-   │            │           │           │            │          │          │

│дартных количеств, %│            │           │           │            │          │          │

│Стандартное         │+/- 3,5     │+/- 3,46   │+/- 7,4    │+/- 8,0     │+/- 3,86  │+/- 5,5   │

│отклонение, %       │            │           │           │            │          │          │

│Доверительный       │+/- 6,5     │+/- 6,1    │+/- 9,0    │+/- 10,2    │+/- 4,8   │+/- 6,8   │

│интервал среднего   │            │           │           │            │          │          │

│(p = 0,95, n = 5), %│            │           │           │            │          │          │

└────────────────────┴────────────┴───────────┴───────────┴────────────┴──────────┴──────────┘

 

Реактивы и растворы. н-Гексан х.ч. Этиловый спирт ректиф., 96-процентный. Этиловый эфир уксусной кислоты. Безводный сульфат натрия ч. Гидроксид натрия х.ч. Хлороводородная кислота х.ч., 0,1 н раствор. Тетраборнокислый натрий, буферный раствор, pH 9,18. Парафин ч. Полиэтилен. БМК, 50-процентный препарат. Дистиллированная вода. Стандартный раствор БМК в спирте с содержанием 100 мкг/мл. Стандартный раствор 2-АБ в спирте с содержанием 100 мкг/мл. Срок хранения стандартных растворов 1 мес.

Приборы и посуда. Аппарат для встряхивания. Ротационный испаритель. Колбы: конические со шлифом на 250 мл; круглодонные на 250 и 500 мл; мерные на 100 мл. Воронки делительные на 500 мл; стеклянные диаметром 40 мм, вместимостью 150 мл. Пипетки на 0,1 мл. Цилиндры мерные на 50 и 100 мл. Мерные пробирки на 5 мл. Полярограф ППТ-1. Полярографическая ячейка 5МБ 887.001. Электрод сравнения хлорсеребряный 5М5 519.004. Графитовый электрод спектральной чистоты. Магнитная мешалка.

Методика приготовления графитового электрода. В тигле расплавляют 10 - 20 г парафина и в расплав добавляют порошок полиэтилена (в количестве 20 - 30% относительно парафина). Каждую последующую порцию полиэтилена добавляют после полного растворения предыдущей. Затем в эту смесь погружают графитовый стержень диаметром до 5 мм, длиной до 100 мм, предварительно выдержанный в н-гексане. Стержень нагревается и выдерживается в расплаве в течение 6 - 8 ч. Затем импрегнированный графитовый стержень вынимают из тигля и после шлифования торца стержня электрод готов к работе. Перед каждым опытом рекомендуются механическое полирование поверхности торца графитового электрода и периодическая промывка электрода этиловым спиртом.

Ход анализа. Экстракция. Пробу исследуемой воды (250 мл) вносят в делительную воронку, приливают 3 мл NaOH и четырежды экстрагируют БМК этилацетатом в течение 5 мин. порциями по 100 мл. Этилацетат сушат через бумажный фильтр с 5 г безводного сернокислого натрия и собирают в круглодонную колбу. Из колбы растворитель отгоняют на ротационном испарителе. Остаток переносят в откалиброванную пробирку, этилацетат упаривают досуха и остаток растворяют в 0,3 мл этилового спирта. Определение проводят полярографическим методом.

Навеску (50 г) образца яблок, огурцов, арбузов, сои, почвы измельчают, заливают 100 мл этилацетата и экстрагируют при энергичном встряхивании в течение 1 ч. Полученный экстракт фильтруют в круглодонную колбу. Эту операцию повторяют еще дважды, встряхивают каждый раз по 30 мин. В объединенный экстракт приливают 25 мл 0,1 н хлороводородной кислоты и ставят отгонять этилацетат на водяной бане. Оставшийся раствор переносят через воронку с фильтром в делительную воронку на 250 мл. Колбу обмывают 2 - 3 раза небольшими порциями 0,1 н хлороводородной кислоты, их объединяют с раствором в делительной воронке. Объем полученного раствора приблизительно должен быть 35 мл. Затем солянокислый раствор трижды промывают н-гексаном порциями по 50 мл. Гексановый слой отбрасывают. К солянокислому раствору прибавляют 3 - 4 мл 6 н гидроксида натрия и 4 раза экстрагируют БМК из раствора, энергично встряхивая в течение 3 мин. свежеперегнанным этилацетатом порциями по 75 мл. Экстракт сушат через бумажный фильтр с 5 г безводного сернокислого натрия и переносят в круглодонную колбу. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе. Остаток переносят в откалиброванную пробирку и упаривают досуха, а затем растворяют в 0,3 мл спирта. Аликвотную часть раствора вносят в полярографическую ячейку и снимают полярограмму.

Определение БМК по 2-АБ. Навеску (50 г) образца яблок, огурцов, арбуза, растений сои, зерна пшеницы, почвы измельчают и заливают 100 мл этилацетата и экстрагируют при энергичном встряхивании в течение 60 мин. Экстракт фильтруют в круглодонную колбу. Эту операцию повторяют еще дважды, встряхивая каждый раз 30 мин. Все порции экстракта фильтруют в круглодонную колбу. В эту же колбу приливают 25 мл 0,1 н раствора хлороводородной кислоты и ставят отгонять этилацетат на водяной бане. Оставшийся кислый раствор переносят через воронку с фильтром в делительную воронку на 250 мл. Колбу обмывают 2 - 3 раза небольшими порциями подкисленной воды и присоединяют к раствору в делительной воронке. Весь объем раствора должен быть приблизительно 35 мл. Затем солянокислый раствор трижды промывают н-гексаном порциями по 50 мл. Гексановый слой отбрасывают. Солянокислый раствор количественно переносят в стакан и добавляют 15 мл 6 н раствора гидроксида натрия и кипятят в течение 15 мин. Чтобы предотвратить бурление раствора, в стакан бросают стеклянные палочки. Затем раствор охлаждают, переносят в делительную воронку и экстрагируют 2-АБ этилацетатом, энергично встряхивая в течение 3 - 5 мин. Экстракцию проводят 4 раза порциями по 70 мл и собирают экстракт в круглодонную колбу, осушив его предварительно безводным сульфатом натрия. Этилацетат отгоняют на водяной бане при температуре 40 °C под вакуумом. Остаток переносят в мерную пробирку, упаривают досуха и растворяют в 0,3 мл спирта. Определение 2-АБ проводят полярографическим методом.

Полярографическое определение БМК. Полярографическое определение БМК проводят на автоматическом полярографе ППТ-1 в постоянно-токовом режиме. Анодом служит графитовый электрод, пропитанный смесью парафина и полиэтилена, катодом - хлорсеребряный электрод сравнения. Для построения градуировочного графика в полярографическую ячейку вносят 5 мл фонового раствора тетраборнокислого натрия (pH 9,18). Полярограмму фонового раствора снимают при диапазоне тока прибора, равного 5 А, скорости поляризации 10 мВ/с. Затем снимают полярограммы различных концентраций стандартного раствора БМК (рис. 10 - не приводится) и строят градуировочный график зависимости высоты волны от концентрации. Для снятия полярограмм исследуемого раствора тщательно промывают ячейку и электроды дистиллированной водой. В фоновый раствор вносят аликвотную часть исследуемого экстракта (при необходимости можно объем остатка упарить до 0,2 мл и весь внести в ячейку) и снимают полярограмму. Измеряют высоту волны исследуемого раствора и по калибровочному графику находят концентрацию БМК. Потенциал окисления полуволны БМК равен +0,65 В.

Полярографическое определение БМК по 2-АБ. Полярографическое определение 2-АБ проводят аналогично определению БМК. Снимают полярограммы стандартных растворов 2-АБ, строят градуировочный график. Потенциал полуволны окисления 2-АБ равен +0,35 В. Снимают полярограммы исследуемого раствора и по градуировочному графику находят концентрацию 2-АБ.

Обработка результатов. Концентрацию препарата БМК (C, мг/кг) рассчитывают по формуле:

 

                                     AV

                                       1

                                 C = ---,

                                     PV

                                       2

 

    где:

    A - найденная по градуировочному графику концентрации БМК, мкг;

    V  - объем остатка, мл;

     1

    P - навеска образца, г;

    V   -  объем  исследуемого  раствора,  внесенного  в  полярографическую

     2

ячейку, мл.

    Содержание БМК (C, мг/кг) находят по формуле:

 

                                   1,44AV

                                         1

                               С = -------,

                                     PV

                                       2

 

    где:

    1,44 - коэффициент пересчета 2-АБ на БМК;

    A - найденное количество 2-АБ, мкг;

    V  - объем остатка, мл;

     1

    V   -  объем  исследуемого  вещества,  внесенного  в  полярографическую

     2

ячейку, мл;

    P - навеска образца, г.

Требования безопасности. Необходимо выполнять все требования техники безопасности при работе с токсичными веществами, растворителями, кислотами и щелочами.