Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 4990-89

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ТРИФУМИНА И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ

В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

 

Краткая характеристика препаратов приведена в Методических указаниях N 5026-89.

    Принцип   метода.  Определение  трифумина  и  его  метаболитов

основано  на  хроматографическом  разделении  в тонком слое оксида

алюминия  (пластинки "Алуфол") и обнаружении зон локализации после

термического  разложения препаратов на пластинке до ароматического

амина;  диазотирования  последнего  нитритом натрия и азосочетания

образовавшегося  производного фенилдиазония с 1-нафтолом. Возможны

также  хроматографирование  в  тонком  слое  силикагеля (пластинки

"Силуфол"  УФ   )  и  обнаружение  пятен  под  хроматоскопом.  Для

             254

обнаружения трифумина может быть применен бромфеноловый реагент.

    Пробы  отбирают  с  концентрированием  (бумажный фильтр "синяя

лента").

    Метрологическая   характеристика   метода.   Предел  измерения

трифумина  и  его  метаболитов  в  анализируемом  объеме  пробы по

реакции  азосочетания  0,2  мкг  (на  пластинках  "Алуфол"), 3 мкг

("Силуфол"),  под  хроматоскопом 0,5 мкг ("Силуфол" УФ   ). Предел

                                                      254

измерения  трифумина  по  реакции  с бромфеноловым реагентом 3 мкг

("Силуфол").   Предел   измерения   в   воздухе  трифумина  и  его

метаболитов  0,007  мг/куб.  м (при отборе 30 л воздуха). Диапазон

измеряемых  концентраций  0,007  -  2 мг/куб. м. Граница суммарной

погрешности измерения трифумина +/- 13,2%, метаболита ФМ-6-1 - +/-

14,5, метаболита ФД-1-1 - +/- 14,8%.

    Избирательность  метода. Трифумин и его метаболиты разделяются

на  хроматограмме.  Определению  по  реакции  азосочетания  мешают

гербициды  из  группы  фенилмочевины, имеющие близкие величины R .

                                                                f

Определению  с бромфеноловым реагентом мешают фосфорорганические и

другие  пестициды,  определяемые  этим реагентом и имеющие близкие

величины  R . Определению под хроматоскопом могут мешать пестициды

           f

и  другие  коэкстрактивные  вещества,  видимые под хроматоскопом в

области  250  -  260  нм  и  имеющие  близкие  к  трифумину  и его

метаболитам  величины  R .  Из  трех  способов  обнаружения  более

                        f

специфичен способ по реакции азосочетания. Сочетание трех способов

обнаружения  позволяет  надежно  идентифицировать  трифумин  и его

метаболиты в присутствии пестицидов названных групп.

Время измерения (включая отбор проб) около 120 мин.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. н-Гексан х.ч. Безводный сульфат натрия ч. Фильтры бумажные "синяя лента". Нитрит натрия ч.д.а. Кислота хлороводородная х.ч. Кислота уксусная х.ч. Гидроксид калия ч. 1-Нафтол ч.д.а. Бромфеноловый синий, индикатор ч.д.а. Нитрат серебра ч.д.а. Стандартные пластинки "Алуфол", "Силуфол" (20 x 20 см), "Хемапол". Препарат трифумин. Метаболиты трифумина ФМ-6-1 и ФД-1-1 х.ч. Основные стандартные растворы трифумина и его метаболитов с концентрацией по 1000 мкг/мл готовят растворением н-гексаном навески каждого вещества 25 мг (0,025 г) х.ч. в мерных колбах вместимостью 25 мл. Трифумин в растворе устойчив при хранении в холодильнике в течение 1 мес., метаболиты - 3 мес. Рабочий стандартный раствор (смесь трифумина и его метаболитов) готовят внесением 2,5 мл основного стандартного раствора каждого вещества в мерную колбу на 50 мл и доведением н-гексаном объема раствора до метки. Концентрация каждого вещества в смеси 50 мкг/мл. Растворы устойчивы в холодильнике в течение 10 дней.

Проявляющие реагенты:

N 1: а - к смеси из 46 мл воды и 4 мл концентрированной хлороводородной кислоты прибавляют 1 г нитрита натрия; б - к раствору 2,8 г гидроксида калия в 50 мл воды прибавляют 0,1 г 1-нафтола. Проявляющие реагенты применяют свежеприготовленными.

N 2: а - растворяют 0,05 г бромфенолового синего в 10 мл ацетона и доводят объем раствора до 100 мл 1-процентным водно-ацетоновым (1:3) раствором нитрата серебра; б - 5-процентный водный раствор уксусной кислоты. Реактивы устойчивы в течение 2 мес.

Приборы и посуда. Электроаспиратор для отбора проб воздуха. Фильтродержатели. Ротационный вакуумный испаритель. Баня водяная. Колбы: мерные на 25, 50 и 100 мл; конические на 100 мл; грушевидные на шлифах вместимостью 50 мл. Стаканы химические на 50 и 100 мл. Пипетки вместимостью 0,1; 1,5; 10 мл. Хроматографическая камера. Пульверизаторы стеклянные. Лампа УФ-света типа "Хроматоскоп" или аналогичная с диапазоном светового излучения 250 - 260 нм.

Отбор проб. Воздух со скоростью 1 л/мин. аспирируют через фильтр "синяя лента", вложенный в фильтродержатель. Рекомендуется отбирать три параллельные пробы. Максимально отбираемый объем воздуха 30 л (в течение 30 мин.). Отобранные пробы хранить в холодильнике не более 3 дней.

Ход анализа. Бумажный фильтр помещают в стакан и заливают 20 мл н-гексана (ацетона). Экстрагируют, перемешивая стеклянной палочкой в течение 5 мин., сливают растворитель через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Экстракцию повторяют, экстракты объединяют. Упаривают растворитель под вакуумом на ротационном испарителе (температура бани 45 °C) до объема около 0,3 мл и хроматографируют. При использовании в качестве экстрагента ацетона остаток экстракта упаривают при комнатной температуре досуха, растворяют в 0,3 мл н-гексана и хроматографируют.

    Определение  методом  ТСХ.  На  пластинку  "Алуфол"  с помощью

капилляра  или микропипетки наносят пробу, ополаскивая колбу 3 - 4

раза  небольшими  количествами (около 0,1 мл) н-гексана. На эту же

пластинку  наносят  0,05  -  0,2 мл рабочего стандартного раствора

смеси  трифумина  и  его метаболитов. Пластинку хроматографируют в

подвижной  фазе  гексан  -  ацетон  (2:1).  После  подъема  фронта

растворителя на 10 см пластинку вынимают из камеры, отмечают линию

фронта  и  оставляют  на  несколько минут на воздухе для испарения

растворителя.   Затем   пластинку  помещают  в  сушильный  шкаф  с

температурой  160  -  170  °C  и  выдерживают в течение 1 ч. После

охлаждения   пластинку   помещают  в  камеру  для  опрыскивания  и

опрыскивают проявляющим реагентом N 1: сначала реактивом а и сразу

же  реактивом  б.  Трифумин  и  его  метаболиты проявляются в виде

красных   пятен.   Величины   R    трифумина,   ФМ-6-1   и  ФД-1-1

                               f

соответственно  0,23;  0,49;  0,82.  Для  этой реакции можно также

использовать пластинки "Силуфол".

    Для  обнаружения трифумина и его метаболитов под хроматоскопом

используют   пластинки   "Силуфол"  УФ   .  В  этом случае пробу с

                                      254

н-гексаном   наносят   на  пластинку  "Силуфол"  УФ   .  Развивают

                                                   254

хроматограмму   в   подвижной  фазе  гексан - ацетон  (2:1),  дают

растворителю   испариться  с  пластинки  и  рассматривают  ее  под

хроматоскопом.    Величины   R    трифумина,   ФМ-6-1   и   ФД-1-1

                              f

соответственно  0,35; 0,61; 0,93. Далее эту же хроматограмму можно

проявить   бромфеноловым   реагентом   (реагент   N   2).  Сначала

опрыскивают  реактивом  а,  затем  5  мин. прогревают при 100 °C и

опрыскивают  реактивом  б.  Бромфеноловым реагентом обнаруживается

только трифумин, метаболиты не обнаруживаются.

Количественное определение трифумина и его метаболитов проводят путем сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы с пятнами стандартных растворов на одной пластинке. Площадь пятна измеряют планиметром или с помощью промасленной миллиметровой бумаги. Прямая пропорциональная зависимость площади пятен от концентрации препаратов наблюдается в пределах 0,2 - 15 мкг (проявляющий реагент N 1), 0,5 - 20 мкг (обнаружение под хроматоскопом), 3 - 25 мкг (проявляющий реагент N 2). При больших концентрациях анализируют аликвотную часть экстракта (0,1 - 0,2 мл) параллельной пробы.

Обработка результатов анализа. Концентрацию трифумина в воздухе (X, мг/куб. м) вычисляют по формуле:

 

                                  GV

                                    2

                             X = -----,

                                 V V

                                  1 20

 

    где:

    G  -  количество  пестицида в хроматографируемом объеме пробы,

мкг;

    V  - объем пробы, взятый для хроматографирования, мл;

     1

    V  - общий объем пробы, мл;

     2

    V    -  объем  воздуха, отобранный для анализа и приведенный к

     20

стандартным условиям, л.

Требования безопасности. Следует соблюдать правила безопасности, рекомендуемые для работы с органическими растворителями, кислотами и щелочами.